Bộ Nhuộm Haematoxylin Eosin (H&E)

Quy cách: 2*100ml / 2*500ml

Hãng: Phygene / Trung Quốc

Nguyên tắc nhuộm:

1. Nguyên tắc nhuộm nhân: Hematoxylin là thuốc nhuộm tự nhiên cơ bản có thể nhuộm nhân. Thành phần chính của chất nhiễm sắc trong nhân tế bào là ADN Trong cấu trúc chuỗi xoắn kép ADN, các nhóm phôtphat trên hai sợi nuclêôtit hướng ra ngoài làm cho mặt ngoài của chuỗi xoắn kép ADN mang điện tích âm và có tính axit. Thuốc nhuộm bazơ hematoxylin được nhuộm bằng cách liên kết ion hoặc liên kết hydro. Hematoxylin có màu xanh lam trong dung dịch kiềm nên nhân có màu xanh lam.

2. Nguyên tắc nhuộm tế bào chất: Eosin là thuốc nhuộm axit tổng hợp hóa học có thể nhuộm tế bào chất trong những điều kiện nhất định. Thành phần chính của tế bào chất là protein, là hợp chất lưỡng tính, độ bắt màu của tế bào chất liên quan mật thiết đến giá trị pH của dung dịch thuốc nhuộm. Khi pH của dung dịch thuốc nhuộm nằm dưới điểm đẳng điện của protein tế bào chất (4,7 ～ 5,0), protein tế bào chất bị ion hóa ở dạng kiềm, và tế bào chất tích điện dương và có thể bị nhuộm bởi thuốc nhuộm axit tích điện âm. Eosin phân ly thành các anion mang điện tích âm trong nước và kết hợp với các cation tích điện dương của protein tế bào chất làm cho tế bào chất có màu và đỏ.

3. Phân biệt: Sau khi nhuộm, một số dung dịch cụ thể được sử dụng để loại bỏ chất nhuộm liên kết quá mức với mô, quá trình này được gọi là phân biệt và dung dịch được sử dụng được gọi là dung dịch phân biệt. Trong nhuộm HE, etanol axit clohydric 1% thường được sử dụng làm dung dịch phân biệt, vì axit có thể phá hủy cấu trúc quinoid của hematoxylin và tách mô khỏi sắc tố và làm mờ dần. Sau khi nhuộm hematoxylin phải phân biệt bằng etanol axit clohydric 1% để loại bỏ thuốc nhuộm hematoxylin liên kết quá mức với nhân và thuốc nhuộm hematoxylin bị tế bào chất hấp phụ, sau đó tiến hành nhuộm eosin để đảm bảo nhân và tế bào chất. nhuộm màu rõ ràng.

4. Hiệu ứng đảo ngược màu xanh lam: Sau khi phân biệt, hematoxylin ở trạng thái ion màu đỏ trong điều kiện axit có màu đỏ, trong điều kiện kiềm, nó ở trạng thái ion màu xanh lam, màu xanh lam. Các phần mô có màu đỏ hoặc hồng sau khi được phân biệt bằng etanol có tính axit, do đó ngay sau khi phân biệt phải dùng nước loại bỏ axit trên các phần mô để ngăn sự phân hoá, sau đó dùng nước có tính kiềm yếu để làm cho các nhân được nhuộm màu xanh lam hematoxylin. được gọi là sự đảo ngược Hiệu ứng màu xanh lam hoặc hiệu ứng màu xanh lam. Ngoài ra, ngâm trong nước máy cũng có thể làm nhân có màu xanh nhưng thời gian lâu hơn.

 

Hướng dẫn

Các bước hoạt động (chỉ để tham khảo):

(1) Nhuộm các đoạn parafin

1. Làm cạn kiệt các mặt cắt để tưới nước

① Tác động lên xylen hai lần, mỗi lần 5-10 phút. 
② (Tùy chọn) Bôi ethanol tuyệt đối hai lần, mỗi lần từ 3 đến 5 phút.                       
③95% ethanol 3 ～ 5 phút
④90% ethanol 3 ～ 5 phút ⑤80% ethanol 3 ～ 5 phút
⑥ Rửa sạch bằng
nước máy hoặc nước cất trong 1 ～ 3 phút


2. Nhuộm

①Dưỡng bằng dung dịch nhuộm hematoxylin trong 5 ～ 8 phút (thời gian cụ thể được điều chỉnh theo kết quả nhuộm và yêu cầu thí nghiệm)
② Rửa sạch bằng nước máy hoặc nước cất trong 5 ～ 10 giây
③ Phân biệt bằng axit clohydric và etanol (tùy chọn) 2 ～ 5s
④ Rửa sạch bằng vòi nước trong 20 ～ 30 giây
⑤ Dung dịch nhuộm màu chuyển sang màu xanh lam 20 ～ 40
giây ⑥ Rửa sạch bằng nước máy trong 30 ～ 60 giây
⑦ Dung dịch nhuộm màu Eosin để nhuộm trong 3 ～ 5 phút (thời gian cụ thể được điều chỉnh theo kết quả nhuộm và yêu cầu thí nghiệm)
⑧ Rửa sạch bằng nước máy cho 1 ～ 5 giây


2. Khử nước, trong suốt, niêm phong

①80% ethanol trong 10 ～ 20 
giây ②90% ethanol trong 10 ～ 20
giây ③95% ethanol cho 2 lần, mỗi lần 1 ～ 2 phút.
④ Etanol khan được dùng làm 2 lần, mỗi lần từ 2 đến 3 phút.
⑤ Xylene trong suốt 3 lần, mỗi lần 2 ~ 3phút.
⑥Màng niêm phong bằng nhựa nguyên sinh.

Kết quả nhuộm: nhân tế bào có màu xanh lam; tế bào chất, sợi cơ, sợi collagen và thần kinh đệm tuyến giáp có nhiều màu đỏ; keratin, hồng cầu, v.v. có màu đỏ cam tươi.

 
(B) Nhuộm phần đông lạnh

Các mặt cắt đông lạnh không cần khử muối và có thể nhuộm trực tiếp sau khi định hình. Phương pháp này cũng giống như các mặt cắt parafin.

Kết quả nhuộm: nhân có màu xanh lam, tế bào chất và sợi có màu đỏ.

 
(3) Nhuộm tế bào

1. Cố định bằng 4% paraformaldehyde trong 10-20 phút.
2. Xả lại bằng nước máy hai lần, mỗi lần 2 phút.
3. Tráng 2 lần bằng nước cất, mỗi lần 2 phút. 
4. Các bước nhuộm, khử sáp, trong suốt và niêm phong giống như các bước nhuộm của phần parafin, và thời gian thực hiện được rút ngắn tương ứng.

Kết quả nhuộm: nhân có màu xanh lam, tế bào chất và sợi có màu đỏ.

 

Các biện pháp phòng ngừa

1. Khai thác các phần phải sạch nhất có thể.
2. Nên thường xuyên thay thế etanol 95%, etanol 90% và etanol 80% bằng chất lỏng mới.
3. Thời gian phân biệt của dung dịch phân biệt etanol axit clohydric cần được xác định theo độ dày của lát cắt, loại mô, cũ và mới, ngoài ra, thời gian rửa nước máy sau khi phân biệt phải đủ để làm sạch kỹ. axit.
4. Nên nhuộm sáng cho quá trình nhuộm, thường chỉ phân biệt được nhân tế bào, tối quá có thể ảnh hưởng đến màu tế bào chất.
5. Thời gian nhuộm màu của các phần đông lạnh phải càng ngắn càng tốt.
6. Chất lỏng màu xanh lam thường sử dụng dung dịch nước amoniac 0,2-1% hoặc chất lỏng xúc tiến màu xanh Scoot hoặc dung dịch nước lithium cacbonat 0,1-1%.
7. Khi sử dụng bộ này lần đầu tiên, nên lấy 1-2 mẫu để làm thí nghiệm trước.
8. Vì sự an toàn và sức khỏe của bạn, vui lòng mặc áo khoác phòng thí nghiệm và găng tay dùng một lần để vận hành.

Vết Hematoxylin và eosin hay còn gọi là vết haematoxylin và eosin (vết H&E hoặc vết HE) là một trong những vết bẩn chính trong mô học. Đây là vết bẩn được sử dụng rộng rãi nhất trong chẩn đoán y tế và thường là tiêu chuẩn vàng (ví dụ: khi bác sĩ bệnh học xem xét sinh thiết nghi ngờ ung thư, phần mô học có thể được nhuộm bằng H&E). Sự kết hợp của hematoxylin và eosin, nó tạo ra màu xanh lam, hoa violet và đỏ.