Thuốc thử Folin phenol - 1mol / L
Giá Bán : Liên hệ

Thuốc thử Folin phenol - 1mol / L

Quy cách: 50/100ml

Hãng: Pygene / Trung Quốc

1. Thuốc thử Folin-Phenol A: (Khách hàng vui lòng chuẩn bị hoặc chọn bộ tương ứng) Hòa tan 1g Na2CO3 trong 50mL 0,2moL / L NaOH, sau đó hòa tan 0,5g (đồng sunfat) CuSO4 · 5H2O trong 100mL dung dịch kali natri tartrat 1% (hoặc natri tartrat), sau đó trộn 50mL trước với 1mL sau, Được sử dụng ngay, cái này Thuốc thử chỉ được sử dụng trong một ngày và hết hạn sử dụng.


2. Thuốc thử Folin-phenol B: Folin thường được sử dụng trong phương pháp Lowry để định lượng tổng số protein Nồng độ của thuốc thử này là 1moL / L. Đây là giải pháp ứng dụng thuốc thử Folin-phenol.

Nguyên tắc xác định phương pháp Folin-phenol: Trong điều kiện kiềm, protein tương tác với đồng để tạo thành phức hợp protein-đồng. Phức hợp này làm giảm thuốc thử axit phosphomolypden-phosphotungstic (thuốc thử FolIn), và hỗn hợp có màu xanh lam đậm (hỗn hợp của màu xanh lam phosphomolypden và màu xanh phosphotungsten), và độ sâu màu tỷ lệ với hàm lượng protein. Phương pháp này vận hành đơn giản, độ nhạy gấp 100 lần so với phương pháp biuret và phạm vi định lượng là 5-100μg protein.

Phương thức hoạt động:

1. Sản xuất đường chuẩn: Chia 14 ống nghiệm thành hai nhóm, thêm 0, 0,1, 0,2, 0,4, 0,6, 0,8, 1mL dung dịch protein chuẩn (250μg / mL), thêm nước đến 1mL, thêm 5mL thuốc thử A, lắc đều, giữ ở 20 -25 ℃ Để yên trong 10 phút, sau đó thêm 0,5mL Thuốc thử B, lắc lên ngay, giữ ở 20-25 ℃ trong 30 phút, sau đó so màu ở bước sóng 500nm. Đo giá trị mật độ quang, lấy giá trị trung bình của hai nhóm đo, lấy protein trong 30 phút rồi so màu ở bước sóng 500nm. Giá trị, lấy giá trị trung bình của hai nhóm, lấy protein làm abscissa, mật độ quang làm tọa độ và vẽ đường chuẩn làm cơ sở định lượng.

2. Xác định mẫu: Lấy 1mL dung dịch mẫu (khoảng 20-250μg / peptit hoặc protein), thêm 5mL Thuốc thử A và trộn đều, để ở 20-25 ℃ trong 10 phút, sau đó thêm 0,5mL Thuốc thử B (Folin-phenol), lắc ngay, ủ ở 25 ℃ trong 30 phút, và sau đó so màu ở bước sóng 500nm. Sử dụng 1 mL nước thay cho mẫu làm mẫu đối chứng trắng. Sau khi xác định, nồng độ của mẫu chưa biết có thể được tìm thấy trên đường chuẩn. Có thể sử dụng mẫu thay thế có chiều dài đường dẫn là 0,5 cm làm mẫu đối chứng trắng. Có thể sử dụng nồng độ của mẫu. Để so sánh với cuvet có chiều dài đường dẫn ánh sáng 0,5 cm, có thể tiến hành thao tác như sau: Lấy 0,2mL dung dịch mẫu (chứa khoảng 5-100μg peptit hoặc protein) và thêm 1mL thuốc thử A (0,3- Đường kính 0,5 cm Trong một ống nghiệm nhỏ), trộn đều sau 10 phút, sau đó cho 0,1mL thuốc thử B vào, trộn ngay và sau 30 phút so màu. Nói chung, nếu nồng độ của peptit hoặc protein là 2-25μg, bước sóng đo là 755nm, và nếu nồng độ trên 25μg, tỷ lệ so màu 500nm là thích hợp.

Các biện pháp phòng ngừa :

1. Phản ứng màu của thuốc thử FolIn là do tyrosin, tryptophan và cystein gây ra, do đó nếu mẫu có chứa axit xitric và các hợp chất sulfhydryl thì chúng đều có ảnh hưởng.

2. Folin chỉ bền trong điều kiện axit, vì vậy cần trộn ngay sau khi cho thuốc thử B vào, nếu không sẽ bị biến màu trước khi thuốc thử B bị hỏng.

3. Sử dụng phương pháp này để xác định nồng độ protein sẽ bị ảnh hưởng bởi tính đặc trưng của protein, tức là các protein khác nhau có độ mạnh hơi khác nhau do mạng lưới khác nhau.

G

0984636355