Bộ nhuộm gram - Gram's Stain Kit

Nhuộm Gram là phương pháp nhuộm phân biệt được sử dụng rộng rãi trong vi khuẩn học. Sau khi nhuộm bằng dung dịch iốt, màu tím tinh thể không hòa tan và không chứa nước được hình thành bên trong có màu tím pha lê và thành tế bào của vi khuẩn da dày hơn. Mạng lưới đường có nhiều lớp và dày đặc Khi khử màu etanol, peptit tạo nên phức hợp lỗ-iot trên màng tế bào xuất hiện màu tím, do đó phức hợp-iot có màu tím trên màng tế bào. Lớp màng ngoài mỏng với hàm lượng lipid cao, lớp peptidoglycan mỏng và mức độ liên kết ngang kém, lipid và các khoảng trống mở rộng sau khi khử màu, khoảng trống khử màu phức iốt.


Các bước:

1. Xử lý mẫu vật
(1). Các bệnh phẩm có các bộ phận vi khuẩn, chẳng hạn như đờm, phân, các loại gạc khác nhau, vết thương trực tiếp.
2) Đối với bệnh phẩm của các bộ phận vô trùng như dịch não tuỷ, dịch màng phổi, nước tiểu, dịch khớp ... cần lấy lượng bệnh phẩm thích hợp (đến 5-7ml) (đến 5-7ml), ly tâm ở 3000 vòng / phút trong 10 phút., và vết bẩn trầm tích bị ố.

2. Sản xuất nhớt
Khi phết dung dịch vi khuẩn, dùng que cấy nhúng dung dịch vi khuẩn lên lam kính, có thể tráng tiêu bản; đối với khuẩn lạc, trước hết lấy nước muối sinh lý và lấy khuẩn lạc để tráng trong nước muối. Vết bẩn được tạo ra phải được làm khô tự nhiên và cố định bằng ngọn lửa. Nhiệt độ không được quá cao và vết bẩn không thể chạm vào mu bàn tay phải được nhuộm.


3. Nhuộm
Nó thường bao gồm bốn bước: nhuộm chính, nhuộm theo màu, khử màu và nhuộm ngược. Phương pháp thao tác cụ thể là

(1) Sau khi thêm thuốc tím pha lê, nhuộm trong 1 phút và rửa bằng nước.
(2) Thêm dung dịch iốt và thuốc nhuộm trong 1 phút, sau đó rửa bằng nước.
(3) Thêm cồn 95%, lắc lam kính và khử màu trong khoảng 20-60 giây theo độ dày của vết bẩn, rửa bằng nước và hút ẩm.
(4) Sau khi thêm safranin, nhuộm trong 1 phút và rửa bằng nước.
(5) Sau khi ngâm hoặc làm khô trong không khí, hãy kiểm tra bằng gương dầu

Lưu ý: Mấu chốt của phương pháp nhuộm Gram là phải kiểm soát chặt chẽ mức độ khử màu của rượu, nếu khử màu quá nhiều thì dương tính sẽ bị nhuộm nhầm; nếu khử màu không đủ sẽ bị ảnh hưởng đến quá trình nhuộm màu, và quá trình khử màu có thể ảnh hưởng đến kết quả nhuộm, chẳng hạn như thời gian nuôi cấy vi khuẩn dương tính quá lâu, hoặc đã chết Và một phần vi khuẩn tự tiêu biến
Thường tiêu cực
4. Quan sát kết quả: Vi khuẩn Gram âm có màu đỏ, vi khuẩn Gram dương xuất hiện. Với một gam đồng nhất, nó quá hiện


Các biện pháp phòng ngừa:
.. 1. Vết bôi của bệnh phẩm không được quá đặc, tuân thủ nghiêm ngặt các yêu cầu thao tác, nếu vết bôi dày, thời gian khử màu nên kéo dài cho đến khi màu tím không còn xuất hiện.
2. Nhiệt độ của lam kính qua ngọn lửa không được quá cao
3. Nếu dung dịch iot trở nên trong suốt thì không thể dùng được.
4. Khi rửa bằng nước, thao tác nhẹ nhàng và rửa bằng bình rửa theo đường chéo của phiến kính để tránh rửa trôi vi khuẩn.
5. Trước khi bôi, nên làm trước mặt sau để xác định vị trí của các xét nghiệm tiếp theo.